蚕蛹蛋白肠内营养制剂干预型糖尿病小鼠代谢特(2)
雅培益力佳SR营养配方粉 由雅培贸易(上海)有限公司生产,批号:741。每100g粉剂含424kcal(1772kJ)能量,其中蛋白质供能比为16.30%、脂肪供能比为37.59%、碳水化合物供能比为 42.22% 、含膳食纤维 3.46g。
京都GT-1640快速血糖测定仪 日本ARKRAY Factory,inc生产企业;京都GT-1640血糖试纸 日本国德岛县美马市胁町大字猪尻字西上野110,生产批号:3H5A4S;压片机 由Rimek公司提供,型号:Mini PRESS-ⅡSF;AU5800全自动生化分析仪 贝克曼库尔特;水冲式笼具型号:M-5型(去底) 购自南京便诊生物有限公司;其余设备均为实验室常用仪器。
1.2 实验方法
1.2.1 蚕蛹蛋白源肠内营养片剂的制备 将自制(分别以短肽1、短肽2和整蛋白型为蛋白源)肠内营养粉剂与市售雅培益力佳粉剂采用压片机压成中心厚度为5~7mm、质量约1g左右的片剂。
1.2.2 糖尿病小鼠模型建立 小鼠适应性饲养一周后,随机选出10只作为对照组,普通饲料喂养,其余小鼠改用高脂饲料喂养,所有小鼠继续喂养3周。第3周末禁食12h(晚9:00开始禁食,自由饮水)过夜左下腹腔注射STZ 40mg/kg BW,正常组注射等体积的0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,各组小鼠同等条件每天注射一次,连续注射3d。第4周末小鼠再次禁食12h(只禁食不禁水),尾静脉取血用快速血糖仪测定空腹血糖值。
1.2.3 实验小鼠分组及肠内营养支持 记录小鼠摄食量、饮水量,挑选具有多饮、多食、体质量下降、血糖值≥11.1mmol/L 的小鼠确定为实验小鼠[18-20],共50只,随机分为5组,每组10只,分别为A组:空白组;B组:益力佳组,投与以雅培益力佳为蛋白源的EN片剂,每只/片/d;C组:短肽1组,投与蚕蛹短肽1蛋白源EN片剂,每只/片/d;D组:短肽2组,投与蚕蛹短肽2蛋白源EN片剂,每只/片/d及E组:蚕蛹蛋白组,投与以蚕蛹蛋白为蛋白源的EN片剂,每只/片/d,将包括F组(对照组)在内的所有小鼠均移至水冲式笼具喂养,小鼠均饮用足量去离子水,保持其环境干燥、清洁。
各组小鼠采用普通饲料继续喂养4周,B、C、D、E四组每天早上9:00点投与对应EN片剂一次,其余时间自由饮水、摄食。
1.2.4 小鼠体重及空腹血糖值(FBG)测定 小鼠连续喂养28d,在给予EN片剂前(0d),给片剂后7、14、21d和28d将对照组(F组)和糖尿病小鼠组(ABCDE)禁食过夜,只禁食不禁水。于次日早上9:00尾静脉取血用快速血糖仪测定各组小鼠空腹血糖值(Fasting Blood Glucose,FBG),并于禁食前一天称量记录小鼠体质量。
1.2.5 口服葡萄糖耐量(OGTT)实验 糖尿病小鼠在EN片剂支持21d后,将A-F组小鼠禁食过夜,于第二天早上9:00投与EN片剂(空白组给予普通饲料),60min后再灌胃给予50mmol/kg葡萄糖,用快速血糖测定仪测定小鼠灌胃前(0min)、灌胃后30、60和120min的血糖值,并计算葡萄糖耐量曲线下面积(Area Under Curve,AUC)(AUC=1/4(0min 血糖值)+1/2(30min血糖值)+3/4(60min血糖值)+1/2(120min血糖值))。
1.2.6 血清生化指标的测定 小鼠在EN片剂支持28d后,将各组小鼠禁食(自由饮水)过夜,于次日早上10:00用乙醚迷晕小鼠后背部大动脉取血,加入3.8%柠檬酸钠溶液抗凝,3000r/min离心5min,取上清液送至上海市第六人民医院(东院)用于血清生化指标的测定,使用贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析仪检测包括血清总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL)及低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL)含量,并计算HDL/TC值。
1.2.7 统计学处理 采用SPSS软件(19.0版)对数据进行处理,所有计量资料采用均数±标准差(±s)表示,利用LSD法检验每组间的显著性差异,p<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果与分析
2.1 蚕蛹蛋白肠内营养制剂对糖尿病小鼠生活状态的影响
对照组小鼠毛色光亮,活动频繁,饮水摄食量正常;糖尿病小鼠毛发枯黄、光泽度下降,精神萎靡,出现多饮、多尿和体重下降,尿液粘度大,粪便呈稀溏状,下腹部侵湿;食用SPP肠内营养片剂支持的 DM小鼠较食用益力佳EN片剂的DM小鼠毛色光泽度高,小鼠活动更为频繁,垫料相对更为干燥。
2.2 蚕蛹蛋白肠内营养制剂对糖尿病小鼠空腹血糖(FBG)的影响
与对照组相比,空白组小鼠FBG水平显著升高(p<0.01),且均高于 11.1mmol/L,说明 STZ 和高脂饲料诱导的小鼠T2DM造模成功。EN制剂支持前后DM小鼠FBG值变化见图1。
图1 肠内营养制剂支持前后糖尿病小鼠空腹血糖值(FBG)变化Fig.1 Effect of silkworm pupa protein Enteral Formula support on T2DM mice FBG index
文章来源:《肠外与肠内营养》 网址: http://www.cwycnyyzz.cn/qikandaodu/2021/0523/737.html